ICS 65.020.30 CCS B 41 1301 石家庄市地方 标准 DB 1301/T 508—2024 毛皮动物细菌性肺炎诊治技术规程 2024 - 03 - 19发布 2024 - 04 - 18实施 石家庄市市场监督管理局 发布 DB 1301/T 508 —2024 I 目次 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 技术流程图 ......................................................................... 1 5 诊断 ............................................................................... 2 6 治疗 ............................................................................... 4 7 无害化处理 ......................................................................... 4 附录A（资料性） 常用抗生素用药参考量 ................................................. 5 图1 毛皮动物细菌性肺炎防控技术流程图 ................................................. 2 表A.1 常用抗生素用药参考量 ........................................................... 5 DB 1301/T 508 —2024 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由石家庄市农业农村局提出。 本文件起草单位：平山县中山貂狐产销专业合作社、石家庄市农林科学研究院。 本文件主要起草人：李伟、李鑫、刘洁、任二军、刘进军、王朋然、邓露芳、宗文丽、郭亮、赵 春付、赵彦雪、韩学良。 DB 1301/T 508 —2024 1 毛皮动物细菌性肺炎诊治技术规程 1 范围 本文件确立了毛皮动物1)细菌性肺炎2)诊治的技术程序，规定了诊断、治疗等环节的操作步骤及要 求，描述了各个程序环节的追溯记录。 本文件适用于养殖场（户）及动物诊疗单位对毛皮动物细菌性肺炎的诊断与防治的技术操作培训 与指导。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 14926.43 实验动物 细菌学检测 染色法、培养基和试剂 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 DB1301/T 084 规模养殖场病害动物无害化处理技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 技术流程图 毛皮动物细菌性肺炎防控技术流程图见图 1。 1) 毛皮动物仅限水貂、银狐、北极狐、貉。 2) 细菌性肺炎指由绿脓杆菌、大肠杆菌、巴氏杆菌、克雷伯氏菌、链球菌等细菌性病原菌引起的终末气道、肺泡和肺间质炎症。 DB 1301/T 508 —2024 2 图1 毛皮动物细菌性肺炎防控技术流程图 5 诊断 5.1 流行病学调查 送诊动物品种、年龄，是否处于易感期；是否与疑似或确诊发病动物有接触；水貂、银狐、北极 狐、貉等毛皮动物均有易感性。 5.2 临床症状观察 患病动物表现咳嗽，呼吸困难，腹式呼吸，精神沉郁，食欲减退，被毛逆乱，体温升高。不同细 菌性肺炎表现如下： a) 绿脓杆菌：多数病兽死后鼻中流出血样液体，部分病兽后肢麻痹现象，主要呈现急性发作， 少数病兽未见症状突然死亡； b) 大肠杆菌：前期咳嗽，逐渐出现哮喘，呼吸衰竭而死，急性病例通常出现口鼻流血的情况； c) 巴氏杆菌肺炎：除有部分呼吸道症状外，有时会伴随呕吐和下痢，出现不自觉的咀嚼等神经症状，常伴随抽搐死亡等现象； d) 克雷伯氏菌：肩、背部、尾部、胯部出现脓肿，破溃后流出灰白色粘稠脓汁； e) 链球菌：眼中有脓性分泌物，鼻流清液，后期成脓性分泌物。 5.3 病理剖检 患病动物剖检后肺脏出血、淤血、肿大，切开有泡沫样血样流出，具体表现如下： a) 绿脓杆菌肺炎剖检为出血性肺炎，肺脏出血淤血，气管内充满血色泡沫； DB 1301/T 508 —2024 3 b) 大肠杆菌肺炎剖检为间质性肺炎，肺炎区质地坚实，呈灰红色或灰白色，部分病例有化脓灶； c) 巴氏杆菌肺炎剖检为气管出血，肺淤血肿大，全身多处粘膜和皮下组织有大量出血点，肝、 脾、肾都有出血点； d) 克雷伯氏菌肺炎剖检为纤维素性肺炎； e) 链球菌肺炎剖检为各器官广泛出血，脾脏肿大紫红色，表面粗糙，兼有小出血点和贫血性梗死，肝脏充血肿大，呈红色或淡黄色，肾肿大有出血点和淤血斑，并有化脓性坏死灶。 5.4 病原学检测 5.4.1 分离培养 采样应符合 NY/T 541 要求。无菌采取鼻腔气管吸取物、胸水、脓液、肺脏等病变组织。划线接种 于含5%胎牛血清的胰蛋白胨大豆琼脂平板（TSA ）培养基，37 ℃培养18 h～24 h，观察菌落生长情况， 无菌落判断为非细菌性肺炎。 5.4.2 涂片镜检 细菌染色按 GB/T 14926.43 执行。将培养的菌作涂片，干燥、固定。固定时通过火焰 1次～2次即可， 不可过热，以载玻片不烫手为宜。固定后按照如下步骤操作： a) 初染：加结晶紫液盖满标本处，染 1 min后水洗，并将玻片上积水轻轻甩净； b) 媒染：加碘液盖满标本处，1 min 后水洗，甩净玻片上积水； c) 脱色：加 95%酒精盖满标本，轻轻摇动玻片，约 20 s后水洗、甩干； d) 复染：加稀释石炭酸复红液或沙黄溶液 1滴～2滴盖满标本，染 30 s后水洗，待标本自干或 用吸水纸印干； e) 镜检：用香柏油覆盖涂菌部位，置油镜观察，绿脓杆菌呈长棒形，紫红色；大肠杆菌呈杆状，紫红色；巴氏杆菌呈卵圆形，两极浓染，紫红色；克雷伯氏菌呈较短粗的杆菌，单独、成双或短链状排列；链球菌呈链状排列，蓝色。 5.4.3 生化试验 挑取单个分离菌接种于细菌微量发酵管中，37 ℃培养 18 h～24 h，观察记录生化反应结果。 5.4.4 分子生物学鉴定 5.4.4.1 细菌培养 分离得到的菌种接种于1 mL 的胰蛋白胨大豆液体培养基 (TSB)培养基中， 37 ℃、220 r/min培养 8 h。 5.4.4.2 16S rRNA 序列扩增 所用引物为 16S rRNA 通用引物， 引物序列为 :P1:5’—AGAGTTTGATCCTGGCTCAG －3’，P2:5’－ GGTTACCTTG TTACGACTT－3’。以提取的分离株 DNA为模板进行 PCR扩增。PCR扩增体系 (总体为25 μL):2 ×EasyTaq PCR Super Mix 12.5 μL，上下游引 物各0.5 μL，DNA模板1 μL，dd H 2O 10.5 μL。PCR 扩增程序： 95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 100 s，共 35个循环；72 ℃ 10 min。预 期扩增的目的片段长度约为1500 bp 。 5.4.4.3 测序分析 DB 1301/T 508 —2024 4 将回收纯化后的PCR 扩增产物测序，根据测序比对结果（同源性比对结果＞ 96%）对分离株进行鉴 定和相应编号。 5.5 诊断结果判定 5.5.1 初步诊断 根据流行病学特征和典型临床症状，结合病理剖检，做出初步诊断。 5.5.2 确诊 根据病原学检测结果，确定是何种细菌感染，结合初步诊断做出确诊。 6 治疗 发病后立即对发病动物进行隔离，每天清扫粪便，对养殖场进行全面消毒。针对不同病原菌选择 不同药物，根据疾病严重程度选择用药量和用药次数，连续用药时间不超过 1周，建议选择药物如下。 a) 绿脓杆菌肺炎使用环丙沙星、庆大霉素、丁胺卡那、头孢哌酮等药物； b) 大肠杆