ICS 65.020.30 CCS B 44 22 吉林省 地方 标准 DB22/T 3679—2024 普通级实验用猫 体内胚胎生产操作规程 Operation procedures for in vivo embryo production of conventional experimental cat 2024-12-31发布 2025-02-10实施 吉林省市场监督管理厅 发布 DB22/T 3679 —2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由吉林省科学技术厅提出并归口。 本文件由吉林省科学技术厅组织实施。 本文件起草单位： 吉林大学。 本文件主要起草人： 俞先峰、袁宝、任文陟、张明军、陈健、刘殿峰、张嘉保、金永勋、权福实。 DB22/T 3679 —2024 2 普通级实验用猫 体内胚胎生产操作规程 1 范围 本文件确立了普通级实验用猫 体内胚胎生产技术流程， 规定了普通级实验用猫体内胚胎生产过程 中供体的选择与饲养管理、供体的超数排卵与人工授精、手术法胚胎采集与胚胎质量鉴定 等操作指示， 描述了记录与档案的追溯方法 。 本文件适用于普通级实验用猫体内胚胎生产操作。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 14925 实验动物 环境及设施 DB22/T 2591 普通级实验用猫病原微生物监测 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 技术流程 普通级实验用猫 体内胚胎生产技术包括供体的选择与饲养管理、供体超数排卵与 配种、手术法胚胎 采集与胚胎质量鉴定。 猫体内胚胎生产技术流程见图 1。 2 供体的超数排卵与配种 （见第 6 章）1 供体的选择与饲养管理 （见第 5 章） 3 采胚及胚胎质量鉴定 （见第 7 章） 4 记录与档案 （见第 8 章） 图1 技术流程图 DB22/T 3679 —2024 3 5 供体的选择与饲养管理 选择 供体应满足以下条件： a) 体质健壮，生殖机能正常，遗传性能稳定， 三代系谱完整； b) 微生物质量符合 DB22/T 2591 要求。 饲养管理 供体的饲养环境应满足 GB 14925 要求；超数排卵前 3 周～5 周应加强饲养管理，可适量补充维 生素和微量元素 。 6 供体的超数排卵与 配种 超数排卵 6.1.1 试剂 促卵泡激素（FSH）、人绒毛膜促性腺激素（ hCG）、生理盐水等。 6.1.2 超数排卵方法 供体猫每隔 12 h，分三天 递减注射， 15 U、15 U、10 U、10 U、5 U、5 U 的促卵泡激素 , 连续注 射 6 次，第四天注射 200 U 的人绒毛膜促性腺激素 。 配种 6.2.1 种公猫的要求 6.2.1.1 体质健壮，生殖机能正常，精液质量良好。遗传性能稳定，三代系谱完整； 6.2.1.2 微生物质量符合 DB22/T 2591 要求。 6.2.2 自然交配 注射促人绒毛膜促性腺激素 后立即放入 种公猫进行交配 ，公猫和母猫交配时应提供安静的环境 。 6.2.3 人工授精 6.2.3.1 器械 腹腔镜、输精枪、输精套管、恒温水浴锅、猫手术台、兽用电动剃毛刀等。 6.2.3.2 精液质量要求 精子活力 70% 以上，畸形率少于 20%。 6.2.3.3 精子采集 利用发情母猫 做台畜采集 种公猫精液 ， 符合 6.2.3.2 要求的精液浓度调至每毫升 2000 万个精子。 6.2.3.4 输精 DB22/T 3679 —2024 4 术前 12 h 禁食，全身麻醉后仰卧在手术架上， 手术部位备皮消毒 。在距离最后一对乳房前 1 cm、 腹中线 2 cm～3 cm 的左侧和右侧位置，分别用手术刀切开 2 mm 小口，用腹腔镜观察 卵巢排卵情况 ， 发现排卵后 用输精枪每侧子宫腔输入不少于 0.5×107 个精子。 7 采胚及胚胎质量鉴定 冲胚步骤 7.1.1 器械及药品 器械：猫手术台、保定绳、兽用电动剃毛刀、手术器械、冲胚管、平皿（ 60mm、100mm）、恒温水 浴锅等。 药品：75% 酒精、碘伏、生理盐水、抗生素、麻醉药、冲胚液等。 7.1.2 胚胎采集时间 及部位 配种或人工授精 24 h～72 h 从输卵管采集 1 细胞期～8 细胞期胚胎 ， 配种或人工授精 5 d～6 d 子宫角采集 桑椹胚和 囊胚。 7.1.3 胚胎采集 7.1.3.1 术前 12 h 禁食，全身麻醉后仰卧在手术架上，手术部位备皮消毒 。 7.1.3.2 手术部位在距离最后一对乳房前端 2 cm、腹中线 0.5 cm 的一侧位置，尽量避开血管 ，纵向 切开 1 cm～2 cm 的刀口，将子宫角和卵巢引出 体外，记录两侧卵巢排卵点或黄体 数，并填写附录 A。 7.1.3.3 胚胎采集方法 为： a) 输卵管冲胚法 ：将猫用胚胎移植细管从输卵管伞部插入 0.5 cm，用拇指与食指扭住，另一端 放入 60 mm 平皿中。用事先抽取 10 mL 冲胚液的 注射器从子宫角端向输卵管方向把冲胚液 缓缓推出。 b) 子宫角冲胚法 ：用针头在子宫角后端（靠近子宫颈）扎 1个小孔，将猫用胚胎移植管从孔导入 到子宫腔内，用拇指与食指扭住，另一端放入 100 mm 平皿中，用事先抽取 10 mL 冲胚液的 注射器从宫管结合处向子宫方向把冲胚液缓缓推出。 7.1.3.4 采集完毕后将子宫复位，常规缝合腹腔， 术后注射抗生素 预防感染，注意保暖。 捡胚与质量鉴定 7.2.1 捡胚 体式显微镜 下用吸卵管在 35℃ 下捡出胚胎，标记供体名称或 编号、胚胎数量及等级等。 采胚记录 见附录 A。 7.2.2 胚胎质量鉴定 7.2.2.1 输卵管采集的胚胎 ，胚胎处于 1细胞期～8 细胞期， 可用胚标准为 卵裂球轮廓清晰 、球体饱 满、卵间隙适中。 7.2.2.2 子宫角采集的胚胎 ，A 级和 B 级为可用胚胎， C 级和 D 级不可用。 胚胎分级标准如下： a) A 级： 胚龄与胚胎发育阶段吻合，形态完整：结构紧凑，卵裂球轮廓清晰、均匀、致密，边 缘整齐；很少或没有游离细胞，变性细胞比例少于 10%。 b) B 级： 胚龄与胚胎发育阶段基本吻合，卵裂球轮廓清晰，边缘整齐，卵裂球较均匀，细胞密 度较小；有少部分游离细胞，变性细胞比例为 10%～25%。 DB22/T 3679 —2024 5 c) C 级： 轮廓不清晰，细胞密度小，结构松散，色泽过暗或过淡，有水泡，游离细胞占一多半， 变性细胞比例为 25%～50%。 d) D 级： 胚龄与胚胎发育阶段不相符，发育停滞，卵裂球少而分散。 8 记录与档案 普通级实验用猫 体内胚胎生产 操作规程 应保留各环节的记录表、 照片和影像等 ，相关档案 应完整， 保存至少 1 年。DB22/T 3679 —2024 6 A A 附录 A （资料性） 体内胚胎生产记录 B A.1 猫体内胚胎生产记录见表 A.1。 表A.1 体内胚胎生产记录 序号 供体猫名称或 编号 种公猫 超数排卵方案 黄体数 回收胚胎数 胚胎等级及质量 退化胚/ 未受精卵 等级