ICS 65.020.20 CCS B 16 DB23 黑龙江省地方标准 DB23/T 3755—2024 植物寄生线虫趋化行为测定技术规程 2024-08-30发布 2024-09-29实施 黑龙江省市场监督管理局 发布 DB23/T 3755—2024 前 言 本文件依据 GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由黑龙江省农业农村厅提出。 本文件起草单位： 中国科学院东北地理与农业生态研究所农业技术中心、黑龙江省农业科学院大庆 分院，铁力市农业综合服务中心 。 本文件主要起草人： 李春杰、王从丽、姜野、谢倚帆、周长军、韦柳利、王旋、徐彬钰、黄铭慧、 吴黎黎。DB23/T 3755—2024 1 植物寄生线虫趋化行为测定技术规 程 1 范围 本文件规定了植物寄生线虫趋化行为测定技术中的原理、仪器设备、器具和试剂、前期 准备工作、植物寄生线虫对植物根的趋化行为测定和无害化处理 。 本文件适用于 植物寄生线虫 中大豆孢囊线虫和蔬菜根结线虫 趋化行为 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅 注日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 SN/T 2757 植物线虫检测规范 DB23/T 2476 大豆孢囊线虫病抗性室内鉴定方法 DB23/T 3185 设施番茄根结线虫病抗性鉴定技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 植物寄生线虫趋化行为 指植物寄生线虫 受外界环境中 信号刺激所产生的趋向性移动行为 。 4 原理 植物寄生线虫能够感应植物的根或根际微生物释放的化学信号而寻找寄主， 利用模拟土 壤三维环境的聚醚 F127胶系统，通过观察植物寄生线虫对植物根趋向反应的特征，测定其 趋化行为。 植物寄生线虫 对植物根的 反应特征 主要表现为吸引、排斥和无趋化 行为。 5 仪器设备、器具和试剂 5.1 仪器设备 体视显微镜 （物镜 1×、2×，目镜 10×）、 湿热灭菌器、 冷藏冰箱、 天平 （ 感量 0.01g）、 磁力搅拌器和恒温培养箱等。 5.2 器具 带盖无菌玻璃瓶（ 1000 mL）、无菌搅拌子、 无菌培养皿（直径 60 mm）、无菌注射器 （10 mL）和无菌刀片等 。 DB23/T 3755—2024 2 5.3 试剂 聚醚 F127胶粉可选用泊洛沙姆 F127（CAS：9003 -11-6）或同等性能的 同类产品，无菌 水符合 GB/T 6682中三级水 。 6 前期准备工作 6.1 聚醚F127胶溶液的配制 配制方法如下： a）将无菌水于 4 ℃～ 10 ℃冷藏冰箱内预冷至少 4 h； b）将 200 mL无菌水加入 无菌玻璃瓶中，放入无菌搅拌子，称取聚醚 F127胶粉 115 g 加入该瓶中，再将 200 mL无菌水加入该瓶中聚醚 F127胶粉上方 ； c）盖上玻璃瓶盖后，置于磁力搅拌器上，于 4 ℃～10 ℃下搅拌至透明液体 ，备用。在 4 ℃～10 ℃下保存，有效期 3 d。 6.2 植物寄生线虫胶悬液的配制 配制方法如下： a）线虫的培养及线虫的获得分别按照 DB23/T 3185 和DB23/T 2476 执行； b）将孵化 3 d以内的线虫沉淀，去 除上清液，将线虫加入胶中，使每 毫升聚醚 F127胶溶 液中含有 300条～ 500条线虫； c）在 4 ℃～10 ℃条件下，用磁力搅拌器将线虫与聚醚 F127胶溶液搅拌均匀，制成线虫 胶悬液，现制现用 。 6.3 植物寄生线虫趋化反应器设置 设置方法如下： a）将无菌培养皿置于冰上， 用无菌注射器吸取线虫胶悬液 10 mL±0.5 mL于培养皿内 ； b）用无菌水将植物根表面清洗干净，用无菌刀片切下 2 cm～3 cm的根尖，置于培养皿 胶悬液中央，每皿放 1个根尖， 以不放根的为对照， 至少重复 6皿，在25 ℃～28 ℃培养。 7 植物寄生线虫对植物根的趋化行为测定 通过植物寄生 线虫的吸引率 判断线虫的趋化反应， 测定方法如下： a）2 h、6 h、12 h、24 h和48 h于体视显微镜下调查和拍照； b）调查植物根尖部位 0 mm至5 mm根表和对照组相应区域内 植物寄生线虫总数 ； c）计算线虫的吸引率 ，根表线虫 吸引率大于对照的线虫表现为吸引，小于对照的线虫 表现为排斥，与对照 无显著差异 的为无趋化行为 。 吸引率按式（1）计算： P = A S × 100 式中： P——吸引率（ %）； A——根表（对照相应区域）线虫 数量； S——胶中初始线虫总数量。 …………………………… （1） DB23/T 3755—2024 3 8 无害化处理 试验用过的材料、器具和废弃物 的处理应符合 SN/T 2757 的要求。