ICS 65.020.20 CCS B 05 DB23 黑龙江省地方标准 DB23/T 3772-2024 寒地高油酸大豆种质资源筛选鉴定 技术规程 2024-08-30发布 2024-09-29实施 黑龙江省 市场监督管理局 发布 DB23/T 3772—2024 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由黑龙江省农业农村厅提出。 本文件起草单位：黑龙江省农业科学院大豆研究所。 本文件主要起草人：王雪扬、刘秀林、赵克臻、任洪雷、张丰屹、袁荣强、张必弦、王家军。 DB23/T 3772—2024 1 寒地高油酸大豆种质资源筛选鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了寒地高油酸大豆种质资源筛选鉴定的环境条件、种质资源种植、种质资源鉴定、数据 分析及技术档案的要求。 本文件适用于黑龙江省寒地高油酸大豆种质资源筛选鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 3095 环境空气质量标准 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB 15618 农用地土壤污染风险管理标准 GB/T 37874 -2019 核酸提取纯化方法评价通则 NY/T 1299 农作物品种试验技术规程 大豆 NY/T 3114.5 大豆抗病虫性鉴定技术规范 NY/T 3566 粮食作物中脂肪酸含量的测定 气相色谱法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 脂肪酸脱氢酶 2 脂肪酸脱氢酶 2(fatty acid desaturase 2 ）是油脂合成代谢的关键酶基因 ,其编码的蛋白催化油 酸(18∶1)进一步脱饱和形成亚油酸 (18∶2)。直接决定了植物中多不饱和脂肪酸的含量与比例，以下简 称FAD2。 4 环境条件 空气环境质量应符合 GB 3095 环境空气质量标准的规定，农田灌溉水质应符合 GB 5084 农田灌溉水 质标准的规定，土壤环境质量应符合 GB 15618 农田灌溉水质标准的规定。 5 种质资源种植 5.1 种子准备 挑选籽粒大小均匀一致、无病斑、无裂纹种子 DB23/T 3772—2024 2 5.2 田间种植 田间播种采用随机区组排列 ,每份种质资源播种 4行,行长 4 m,行距 0.65 m,株距 0.1 m,3次重复， 精量点 播，试验地块四周分别设 4行保护行。 5.3 田间管理 田间管理应按照 NY/T 1299 农作物品种试验技术规程 大豆的规定。 6 种质资源鉴定 6.1 生长特性鉴定 鉴定种质资源花色、叶型、茸毛色、株型、结荚习性、荚色、种皮色、脐色、成熟期等 9个描述性 表型性状，高油酸种质资源描述性表型性状调查见表 1。 表1高油酸种质资源描述性表型性状调查 资源编号 花色 叶型 茸毛色 株型 结荚习性 荚色 种皮色 脐色 成熟期 6.2 抗性鉴定 抗性鉴定应按照 NY/T 3114.5 大豆抗病虫性鉴定技术规范的规定。 6.3 产量性状鉴定 测定株高、有效分枝数、主茎节数、底荚高度、单株荚数、单株粒数、百粒重、倒伏等级等 8个产 量相关性状。高油酸种质资源表型性状调查见表 2。 表2高油酸种质资源表型性状调查 性状 重复 1 重复 2 重复 3 平均值 株高（ cm） 有效分枝数（个） 主茎节数（个） 底荚高度 （cm） 单株荚数 （个） 单株粒数 （个） 百粒重（g） 倒伏等级（级） DB23/T 3772—2024 3 6.4 DNA提取及质量要求 DNA提取应按照 GB/T 37874 -2019 核酸提取纯化方法评价通则的规定。 6.5 FAD2基因位点筛选 利用分子标记针对 FAD2已知基因进行分析，已知 FAD2基因以及相关引物信息见表 3。 表3 已知FAD2基因以及相关引物信息 等位基因名称 基因号 引物名称 引物序列 GmFAD2-2A Glyma19g32930.1 GmFAD2-2A F 5'-GTGAATGCTCATGGCTCAC -3' GmFAD2-2A R 5'-TCTCCACATTGCCTTGAC -3' GmFAD2-2B Glyma19g32940.1 GmFAD2-2B F 5'-GTCACTGCTCATCGCTCAC -3' GmFAD2-2B R 5'-TGGCTCCACATAAATACACTCT -3' GmFAD2-1A Glyma10g42470.1 GmFAD2-1A F 5'-GCCGCAGTAGAGGACGAT -3' GmFAD2-1A R 5'-TAGGCAGAAAGCTATAAGCAGA -3' GmFAD2-1B Glyma20g24530.5 GmFAD2-1B F 5'-CTCTTCTTTCCACCTACA -3' GmFAD2-1B R 5'-CTTCCATAACTCCCACTA -3' GmFAD2-2C Glyma03g30070.1 GmFAD2-2C F 5'-CTCACCCTCCTCTTCACA -3' GmFAD2-2C R 5'-CACGCTTAGCATTCATTT -3' 6.6 油酸含量测定 油酸含量测定应按照 NY/T 3566 粮食作物中脂肪酸含量的测定 气相色谱法的规定。 7 技术档案 应建立技术档案，内容包括环境条件、种质资源种植、种质资源鉴定。