ICS 65.020.20 CCS B 23 DB23 黑龙江省 地方标准 DB 23/T 3778-2024 寒地野生大豆耐盐碱性鉴定技术规程 2024-08-30 发布 2024-09-29 实施 黑龙江省市场监督管理局 发布 DB23/T 3778—2024 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 -2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由黑龙江省农业农村厅提出。 本文件起草单位：黑龙江省农业科学院耕作栽培研究所。 本文件主要起草人：刘建新、樊超、梁文卫、杨光、李炜、刘淼、毕影东、邸树峰、李佶恺、张舒 昱。 DB23/T 3778—2024 1 寒地野生大豆 耐盐碱性 鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了寒地野生大豆耐盐碱性鉴定的术语和定义、鉴定溶液配制、芽期耐盐碱性鉴定、苗期 耐盐碱性鉴定、耐盐碱性分级标准。 本文件适用于寒地 野生大豆种质资源的耐盐碱性鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 5520 粮油检验 发芽试验 DB23/T 2024 寒地野生大豆资源扩繁更新技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件。 3.1 野生大豆 耐盐碱性 野生大豆对盐碱环境的敏感程度。 4 鉴定溶液的配制 4.1 基础盐碱液配制 配制1000 mmol· L-1的基础盐碱液 1 L：2.96 g NaCl，5.30 g Na 2CO 3，37.80 g NaHCO 3，63.90 g Na2SO 4，摩尔比为 1:1:9:9，分别用 无菌水溶解，混合后定容至 1 L。灭菌锅高压 121 ℃，20 min灭菌 后，4 ℃冰箱冷藏保存。 4.2 芽期胁迫盐碱液配制 芽期的盐碱溶液浓度为 80 mmol· L-1，即取出 80 mL基础盐碱液，用无菌水定容至 1 L。 4.3 苗期胁迫盐碱液配制 苗期的盐碱溶液浓度为 200 mmol· L-1，即取出 200 mL基础盐碱液，用基础营养液定容至 1 L。 基础营养液盐分组成与浓度按 表1。 DB23/T 3778—2024 2 表1 基础营养液盐分组成与浓度 组分 盐分浓度 mg·L-1 组分 盐分浓度 mg·L-1 KNO 3 253.00 H3BO 3 6.20 NH 4NO 3 40.00 MnSO 4 22.30 KH 2PO 4 68.00 ZnSO 4 8.60 MgSO 4 120.50 Na2MoO 4 0.50 C10H12N2NaFe 36.70 CuSO 4 0.05 KI 0.83 CoCl 2 0.05 Ca（NO 3）2 472.50 5 芽期耐盐碱性 鉴定 5.1 种子选择与处理 5.1.1 种子选择 选取收集或保存的寒地野生大豆，经单粒传的后代 。 5.1.2 种子处理 按DB23/T 2024 规定的方法 ，对种子进行 破皮处理。 破皮后的野生大豆种子用 75%的乙醇溶液浸泡 1 min，期间充分震荡，进行表面消毒，消毒后的种子用无菌水清洗 3次，置于灭菌后的滤纸上吸干表面 水分。 5.2 培养 5.2.1 播种 宜采用55 mm直径的培养皿培养，将两层 55 mm直径的定性滤纸置于培养皿底部铺平，将处理好的 种子每皿均匀摆放 20 粒，每份材料 6 皿。 5.2.2 胁迫处理 将3 皿加入3 mL芽期胁迫盐碱液； 3 皿加入3 mL无菌水作为空白对照。盖好盖子，做好标识 ， 进行培养。 每隔一天先将残余的水分吸走，用盐碱胁迫溶液冲洗滤纸 2~3 次，吸净残余水分后再补充 3 mL胁 迫溶液，对照加入无菌水。 5.2.3 培养条件 按照GB/T 5520 标准在培养箱中进行 暗培养，培养温度为 25 ℃。 5.3 调查 5.3.1 发芽势 DB23/T 3778—2024 3 发芽势调查按 GB/T 5520 的规定执行。处理后第3 d统计种子发芽数 、计算发芽势， 发芽标准为芽 长达到种子长度一 半以上。 5.3.2 发芽率 发芽率调查按 GB/T 5520 的规定执行。 处理后第7 d统计种子发芽数 、计算发芽率， 发芽标准为芽 长达到种子长度一 半以上。 5.3.3 芽长 培养7 d时，测定种子芽的长度。 5.4 统计方法 5.4.1 统计值的计算 相对发芽势：盐碱处理发芽势与对照发芽势的比值； 相对发芽率：盐碱处理发芽率与对照发芽率的比值； 相对芽长：盐碱处理芽长与对照芽长的比值。 5.4.2 芽期耐盐碱度 野生大豆芽期耐盐碱度按（ 1）式计算： STD = RGE + RGR + RFL ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ ‥‥（1） 式中： STD —野生大豆芽期耐盐碱度； RGE —相对发芽势； RGR —相对发芽率； RFL —相对芽长。 6 苗期耐盐碱性鉴定 6.1 种子选择与处理 6.1.1 种子选择 种子选择方法同 5.1.1。 6.1.2 种子处理 按DB23/T 2024 规定的方法，对种子进行 破皮处理 ，破皮后的野生大豆种子用无菌水清洗 3 次。 6.1.3 催芽 托盘中放置灭菌后的滤纸，加入无菌水保持滤纸湿润且无积水 。将种子均匀铺在滤纸表面，托盘上 覆盖保鲜膜保湿， 托盘置于培养箱中 25 ℃催芽 2 d。 6.2 培养与胁迫处理 6.2.1 播种与培养 DB23/T 3778—2024 4 选取长势一致的发芽种子均匀播种到已加入蛭石的盆钵中，盆钵直径和高度为 10 cm左右，底部 有 孔。每个材料播 10 盆，各盆蛭石量相等，播深 0.5 cm~1.0 cm，播后浇透水 。 置于光照培养箱中 25 ℃培养， 光强3000 Lx~5000 Lx，光照 /黑暗 12 h/12 h，相对湿度 60%，保 持蛭石湿润。出苗后开始浇 表1的基础营养液，每2 d 浇一次，浇液量是蛭石体积的 2倍，每盆保苗 10 株。 6.2.2 胁迫处理 在幼苗长至第一片复叶完全展开 、第二片复叶展开 初期时，处理组开始浇苗期盐碱胁迫液。对照组 继续浇表1的基础营养液。每 2 d浇1 次，浇液量是蛭石体积的 2 倍。 6.3 性状调查 盐碱胁迫处理 7 d后，观察苗情表现 ，并按表 2苗情分类标准 进行统计 。 表2 耐盐碱胁迫处理下单株苗情分类标准 苗情类别 性状表现 1 生长基本正常，全株几乎无萎蔫或叶缘蜷曲 2 全株1/4叶片萎蔫或叶缘蜷曲，叶色变黄 3 全株1/3叶片萎蔫或叶缘卷曲，叶尖、叶缘焦枯 4 全株1/2叶片萎蔫或叶缘卷曲，叶枯、叶落 5 全株枯死或接近死亡 6.4 苗期耐盐碱 度 野生大豆苗期耐盐碱度按（ 2）式计算： %1005= NtCiNiSTI …………………………………………（ 2） 式中： STI —苗期耐盐碱 度； Ci —苗情类别； Ni —每类苗情株数； 5 —最高苗情类别； Nt —检验样本总数。 7 耐盐碱性分级标准 7.1 耐盐碱性级别 耐盐碱性分 5级，从强到弱依次为：Ⅰ级，高耐；Ⅱ级，耐；Ⅲ级，中等；Ⅳ级，敏感；Ⅴ级，高 敏。 7.2 寒地野生大豆芽期的耐盐碱性级别 DB23/T 3778—2024 5 芽期的耐盐碱性分级按表 3的规定执行。 表3 野生大豆芽期耐盐碱性分级标准 级别 芽期耐盐碱度（ STD） 耐盐碱性 Ⅰ 3≥STD＞2.4 高耐 Ⅱ 2.4≥ STD＞2.1 耐 Ⅲ 2.1≥ STD＞0.8 中等 Ⅳ 0.8≥STD＞0.3 敏感 Ⅴ 0.3≥ STD＞0 高敏 7.3 寒地野生大豆芽期的耐盐碱性级别 苗期的耐盐碱性分级按 表4的规定执行。 表4 野生大豆苗期耐盐碱性分级标准 级别 苗期耐盐碱 度（STI/%） 耐盐碱性 Ⅰ ＜20.0 高耐 Ⅱ 20.0≤ STI＜40.0 耐 Ⅲ 40.0≤ STI＜60.0 中等 Ⅳ 60.0≤STI＜80.0 敏感 Ⅴ ≥80.0 高敏