ICS 11.020 C 62 中 华 人 民 共 和 国 卫生行 业 标 准 WS/T 570—2017 肠道蠕虫检测 改良加藤厚涂片法 Detection of intestinal helminth s— The Kato -Katz method 2017 - 08 - 01发布 2018 - 02 - 01实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 WS/T 570—2017 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 —2009给出的规则起草。 本标准起草单位： 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、江西省寄生虫病防治研究所、云南 省大理州血吸虫病防治研究所。 本标准主要起草人 ：陈颖丹、诸廷俊、周 长海、许静、郑彬、李石柱、肖宁、周晓农、曾小军、刘 宏坤。 WS/T 570—2017 1 肠道蠕虫检测 改良加藤厚涂片法 1 范围 本标准规定 了改良加藤厚涂片 法检测肠道蠕虫 的操作流程。 本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对人体粪便内蠕虫卵的检测。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 改良加藤厚涂片法 the Kato - Katz's method 通过过滤，定量板取样，用甘油 浸泡的亲水性透明玻璃纸对粪样进行透明的一种粪便中蠕虫 卵的定性与定量检测方法。 2.2 每克粪便虫卵数 eggs per gram；EPG 1g粪便中某种寄生虫 卵的数目，是 用来表示感染强度的指标。 2.3 肠道蠕虫 intestinal helminth 寄生于人体 肠道内借助肌肉伸缩而做蠕形运动的多细胞无脊椎动物。 3 仪器设备 生物显微镜（100×~400×）和测微尺。 4 试剂材料 4.1 试剂 透明液的成分及配制：由 纯甘油100ml、3%孔雀绿（或亚甲基蓝） 水溶液1ml和蒸馏水100ml 配制而成。 4.2 材料 4.2.1 塑料定量板 WS/T 570—2017 2 规格为30mm×40mm×1mm，中央孔为圆台形， 其上底半径 3mm，下底半径 4mm，高1mm，容积为 38.75mm3 。 4.2.2 刮棒 60mm ×6mm ×2mm，一端平头，另一端为斜切面，斜切面斜边长 8.23mm。 4.2.3 尼龙绢 80目，即每英寸（ 25.4mm）长度内的筛孔数目为 80，裁剪成 8cm×8cm大小。 4.2.4 亲水性透明玻璃纸 厚40μm，裁剪成 25mm×40mm大小，使用前在透明液中浸泡 24h以上。 4.2.5 载玻片 76.2mm ×25.4mm×1mm。 5 检测步骤 5.1 样本采集 检测样本为新鲜的粪便。 采集受检者粪便约30g，存放于广口带盖且防渗漏的密闭容器中， 将受检者基本信息（姓名、编号、送检日期）标记于容器外部。采集后的样本应在 24h内送检， 如未能及时检测，应在 4℃条件下保 存。 5.2 改良加藤厚片 制作 5.2.1 取一张洁净的载玻片，在一端标注样本编号。 将塑料定量板小孔朝上 放置在载玻片中部 。 5.2.2 将尼龙绢 平放在粪便上 摊开，用刮棒轻压尼龙绢，使尼龙绢与粪便紧密贴合，再用刮棒 在尼龙绢 上方刮取粪 便。 5.2.3 将通过尼龙绢刮出的粪样填入定量板的中央孔中， 直至填满刮平。 5.2.4 垂直向上移去 定量板， 使粪样留在载玻片上。 5.2.5 取一张已浸泡过的亲水性透明玻璃纸，抖掉多余的浸泡液后， 覆盖在粪便上。 取另一块 洁净载玻片十字交叉垂直均匀 轻压粪样，使亲水性透明玻璃纸下的 粪便均匀展开 ， 不溢出载 玻片， 形成厚薄一致的圆形粪膜 ，粪膜直径约 2 cm 。 5.2.6 用拇指固定亲 水性透明玻璃纸，将用来压粪样的载玻片轻轻平移取下，制好的改良加藤 厚涂片放置在室温下使其透明 ，透明时间不易超过 2h。 5.3 镜检 将已透明的改良加藤厚涂片置于生物 显微镜下镜检， 在 10×物镜下按一定规律， 如由上到下， 由左至右检查全片，如需进一步鉴别在 40×物镜下观察。 5.4 结果判定 WS/T 570—2017 3 5.4.1 根据改良加藤厚涂片中虫卵的大小、形状、颜色、卵壳、内容物、卵盖、小棘等特征综 合判定虫种（ 参见附录 A）。 5.4.2 计数改良加藤厚涂片中虫卵数量，计算 EPG，并判定感染强度 （参见附录 B）。 5.5 注意事项 5.5.1 粪膜透明后应及时镜检。若 透明过度，薄壳虫卵易变形 不易辨认 ，容易造成漏检或误判。 一般在室温 25℃、75%湿度下，改良加藤厚片 放置不宜超过 2小时。若空气湿度大 ，气温较低， 放置时间可适当延长。 空气干燥，气温高，放置时间适当缩短。透明时切忌为了缩短透明时间而 将改良加藤厚片放入烤箱或在阳光下暴晒。 5.5.2 在药物疗效考核等防治专项研究中， EPG的计算还须再乘以粪便系数（成形便 1，半成形 便1.5，软便2，粥样便 3，水泻便 4），得到每克粪便虫卵数。由于儿童粪便总量比成人少，因 此儿童每单位体积粪便中含虫卵数比成人多，故应以成人为标准，按比例减少，即儿童粪便所得 虫卵数， 1岁-2岁的乘以 25%，3岁-4岁的乘以 50%，5岁-10岁的乘以 75%，11岁以上不减 少。 WS/T 570—2017 4 A A 附 录 A （资料性附录） 人体粪便中蠕虫卵鉴别 A.1 虫卵种类 通过改良加藤厚涂片法能够检测到的寄生虫卵有：似蚓蛔线虫卵、毛首鞭形线虫卵、蠕形住 肠线虫卵、钩虫卵（十二指肠钩口线虫卵 、美洲板口线虫卵 和锡兰钩 口线虫卵）、曼氏迭宫绦虫 卵、阔节裂头绦虫卵、带绦虫卵（猪带绦虫卵、牛带绦虫卵、亚洲带绦虫卵）、微小膜壳绦虫卵、 缩小膜壳绦虫卵、司氏伯特绦虫卵、华支睾吸虫卵、布氏姜片吸虫卵、卫氏并殖吸虫卵、日本血 吸虫卵、 曼氏血吸虫卵、 片形吸虫卵（肝片形吸虫卵、巨 片形吸虫卵）、异型科吸虫卵、棘口科 吸虫卵等，上述虫卵可在显微镜下 通过其形状、大小、颜色、内容物、卵盖结构等加以鉴别 （见 表A.1）。 表A.1 人体粪便中蠕虫卵鉴别要点 虫卵 大小 形状 颜色 卵盖 卵壳 内容物 其他特 征 模式图 华支睾 吸虫卵 （27~35 ）μ m× （12~20 ）μ m 形似芝 麻， 一端 较窄 淡黄褐 色 有 卵盖周围的 卵壳增厚形 成肩峰 毛蚴 卵盖对 端有小 疣状突 起 布氏姜 片吸虫 卵 （130~1 40）μm× （80~85 ）μm 椭圆形 淡黄色 有 薄而均匀 近卵盖 端有 1 个为未 分裂卵 细胞， 周 围约 20~40个 卵黄细 胞 大型蠕 虫卵 卫氏并 殖吸虫 卵 （80~11 8）μm× （48~60 ）μm 椭圆形， 左右多 不对称， 前端较 宽， 后端 稍窄。 金黄色 有 厚薄不均， 卵盖对端 往 往增厚 虫卵顶 端有一 半透明 卵细胞 及10~20 个卵黄 细胞及 许多颗 粒 — WS/T 570—2017 5 日本血 吸虫卵 （58~10 9）μm× （44~80 ）μm 略呈椭 圆形 淡黄色 无 厚薄均匀 内含一 成熟的 毛蚴， 毛 蚴和卵 壳间常 可见到 大小不 等的圆 形或椭 圆形的 油滴状 毛蚴分 泌物 卵壳一 侧有一 逗点状 小棘 曼氏血 吸虫卵 （114~1 80）μm× （45~73 ）μm 长卵圆 形 棕黄色 无 卵壳粗糙， 双层 可见云 雾状毛 蚴轮廓 侧棘长 而大 片形吸 虫卵 （肝 片形吸 虫卵与 巨片形 吸虫卵） （130~1 90）μm× （63~90 ）μm 椭圆形 淡黄褐 色 有 薄，分两层 卵细胞 和卵黄 细胞 虫卵较 大 异型科 吸虫卵 （19~39 ）μm× （11~20 ）μm 形似芝 麻， 一端 较窄 黄褐色 有 卵壳较薄 内含成 熟毛蚴 虫卵小， 与华支 睾吸虫 卵相似 棘口科 吸虫卵 （80~14 0）μm× （40~90 ）μm 椭圆形 淡黄色 有 卵壳薄 内含未 分化的 卵细胞 和若干 个卵黄 细胞 虫卵较 大 曼氏迭 宫绦虫 卵 （52~76 ）μm× （31~44 ）μm 椭圆形 浅灰褐 色 有 较薄 一个卵 细胞和 若干个 卵黄细 胞 — WS/T 570—2017 6 阔节裂 头绦虫 卵 （55~76 ）μm×宽 （41~56 ）μm， 卵圆形 浅灰褐 色 有 较厚 卵内胚 胎已开 始发育 另一端 有一小 棘 带绦虫 卵 （猪带 绦虫卵、 牛带绦 虫卵、 亚 洲带绦 虫卵） 直径 （31~43 ）μm 球形或 近似球 形 棕黄色 无 很薄而且脆 弱 胚膜内 是球形 的六钩 蚴， 直径 14μm ~20μm， 有3对 小钩 外面有 较厚的 胚膜， 具有放 射状的 条纹 微小膜 壳绦虫 卵 （48~60 ）μm× （36~48 ）μm 圆球形 或近圆 球形 无色透 明 无 很薄 内有透 明胚膜， 胚膜两 端略凸 起并由 该处各 发出 4~8 根丝状 物， 弯曲 的延伸 在卵壳 和胚膜 之间， 胚 膜内含 有一个 六钩蚴 — 缩小膜 壳绦虫 卵 （60~79 ）μm× （72~86 ） μm 长圆形 黄褐色 无 较厚