ICS 11.020 C 59 WS 中 华 人 民 共 和 国 卫生行 业 标 准 WS/T 590—2018 基孔肯雅热诊断 Diagnosis for chikungunya fever 2018-03-06发布 2018-08-01实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 WS/T 590—2018 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 缩略语 ................................ ................................ ............ 1 3 诊断依据 ................................ ................................ .......... 1 4 诊断原则 ................................ ................................ .......... 2 5 诊断 ................................ ................................ .............. 2 6 鉴别诊断 ................................ ................................ .......... 2 附录A（规范性附录） 基孔肯雅热血清学检测方法 ................................ ........ 3 附录B（规范性附录） 基孔肯雅热病原学检测方法 ................................ ........ 8 附录C（资料性附录） 基孔肯雅热的鉴别诊断 ................................ ........... 11 附录D（资料性附录） 基孔肯雅热流行病学及临床表现 ................................ ... 14 参考文献 ................................ ................................ ............ 16 WS/T 590—2018 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 —2009给出的规则起草。 本标准起草单位：广东省疾病预防控制中心、广州市第八人民医院、中国疾病预防控制中心、中国 疾病预防控制中心病毒病预防控制所、东莞市人民医院。 本标准主要起草人 ：何剑峰、张复春、李德新、王世文、王建、柯昌文、钟豪杰、殷文武、殷思纯、 郭汝宁。 WS/T 590—2018 1 基孔肯雅热诊断 1 范围 本标准规定了基孔肯雅热的 诊断依据、 诊断原则、诊断及鉴别诊断。 本标准适用于全国各级各类医疗卫生机构及其医务人员对基孔肯雅热的诊断。 2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CHIKV：基孔肯雅病毒（ chikungunya virus） ELISA：酶联免疫吸附试验 （enzyme-linked immunosorbent assay） IgG：免疫球蛋白 G(immunoglobulin G) IgM：免疫球蛋白 M(immunoglobulin M) RNA：核糖核酸 (ribonucleic acid) RT-PCR：逆转录 -聚合酶链反应 (reverse transcription -polymerase chain reaction) 3 诊断依据 3.1 流行病学史 发病前12 d内，曾经到过基孔肯雅热流行区或居住场所或工作场所周围曾有本病发生。 3.2 临床表现 3.2.1 发热：急 起高热，体温可达 39℃以上，一般发热 1 d～7 d。部分病人热退后再次出现发热，表 现为双峰热，持续 3 d～5 d恢复正常 。常伴有寒战、头痛、背痛、全身肌肉疼痛，畏光，恶心、呕吐 等症状。 3.2.2 关节疼痛：关节疼痛 主要累及手腕 和踝趾等小关节 ，也可涉及膝和肩等大关节，腕关节受压引 起剧烈疼痛是本病的重要特征 。急性期多个 关节出现疼痛 或关节炎表现，可有 肿胀或僵硬，晨间较重， 严重者不能活动，通常 1周～3周缓解。部分病例关节疼痛可持续数月。 3.2.3 皮疹：发病 后2 d～5 d，半数以上病例在 躯干、四肢伸侧、手掌和足底 出现红色斑丘疹或紫癜， 疹间皮肤多为正常，部分伴有瘙痒感，数天后消退，可伴 脱屑。 3.3 实验室检查 3.3.1 急性期血清特异性 IgM抗体阳性（见附录 A中A.1）。 3.3.2 恢复期血清特异性抗体（ IgG或中和抗体）滴度比急性期 升高4倍及以上，或急性期抗体阴性 而恢复期抗体阳性（见 附录A中A.2、A.3）。 3.3.3 急性期血清标本分离到基孔肯雅病毒（见附录 B中B.1）。 WS/T 590—2018 2 3.3.4 急性期血清标本检测到基孔肯雅病毒核酸（见 附录B中B.2）。 4 诊断原则 依据患者的流行病学史、临床表现及实验室检查结果进行综合判断。在 从未发生过基孔肯雅热流行 的地区，应以实验室检查依据为主。 5 诊断 5.1 疑似病例 符合3.1，3.2.1、3.2.2和/或 3.2.3，并排除登革热和 /或其他发热伴出疹性疾病者。 5.2 临床诊断病例 符合5.1，并同时符合3.3.1。 5.3 确诊病例 符合5.1或5.2，并同时符合 3.3.2、3.3.3、3.3.4中任一项 。 6 鉴别诊断 基孔肯雅热应与登革热、甲病毒（ Alphavirus ）感染、传染性红斑、感染后关节炎（包括风湿热）、 猩红热、立克次体病（斑疹伤寒、恙虫病）、 麻疹、药疹等相鉴别。参见附录 C与附录D。 WS/T 590—2018 3 A A 附 录 A （规范性附录） 基孔肯雅热血清学检测方法 A.1 酶联免疫法检测基孔肯雅病毒（ chikungunya virus，以下简称 CHIKV）IgM抗体(IgM抗体捕获酶联 免疫吸附试验 ) A.1.1 原理 首先用抗人 IgM µ链抗体（捕获抗体）包被 96孔板，如果待检血清中存在 CHIKV抗IgM抗体，则与包 被的捕获抗体结合，然后再与 CHIKV抗原结合，最后与加入酶标抗 CHIKV抗体结合，酶与显色底物相互作 用就会出现显色反应。 A.1.2 材料和试剂 材料和试剂如下： a) 包被液：碳酸钠 /碳酸氢钠缓冲液， pH 9.6，1.59 g Na2CO3和2.93 g NaHCO 3溶解于1 L水中； b) 洗液：磷酸盐缓冲液（ PBS），含0.05％吐温20，pH 7.2； c) 封闭液：含 5％奶粉和0.05％吐温 20的PBS； d) 包被抗体：抗人 IgMμ链抗体； e) 病毒抗原：灭活的纯化 CHIKV抗原，无感染性； f) 细胞抗原：经纯化的未感染病毒细胞培养液； g) 酶标抗体：辣根过氧化物酶标记的 CHIKV单克隆抗体； h) 酶底物： TMB； i) 终止液： 2N H 2SO4； j) 临床标本：急性期病人血清和 /或脑脊髓液标本；阳性和阴性血清对照； k) 设备：平底 96孔板，洗板机，酶标仪，恒温箱，单通道和多通道移液器，试剂储液槽，保鲜 袋，吸水纸。 A.1.3 检测方法 按以下步骤操作： a) 用记号笔在酶标板上标记实验编号，明确每份临床标本的位置。 b) 用pH 9.6的包被液按 1∶2 000比例稀释抗人 IgMμ链抗体，按 75 µL/孔加入到 96孔板的孔 中，4℃孵育过夜 。 c) 倒掉抗体包被液，把板中剩余液体在吸水纸上吸干。每孔加入封闭液 200 µL封闭反应板。室 温孵育30 min。 d) 用洗液在自动洗板机上洗板 5次。每次洗涤要保证每孔加满洗液 。 e) 病人血清用稀释液进行 1∶100稀释，脑脊髓液进行 1:10稀释，然后按 50 µL/孔，各加 2孔， 同时用稀释液按 1∶100比例稀释阳性对照血清和阴性对照血清， 各加 2孔。37℃湿盒孵育 1 h。 洗涤5遍。 f) 稀释病毒抗原和细胞抗原。每排左边 1孔按50 µL/孔加入病毒抗原，每排右边 1孔按50 µL/ 孔加入细胞抗原。 4℃湿盒孵育过夜。洗涤 5遍。 WS/T 590—2018 4 g) 按50 µL/孔加入辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体， 37℃湿盒孵育 1 h，洗板5遍。 h) 所有孔中加 50 µL/孔的TMB底物液，包括 1孔未加样的空白对照孔。避光室温孵育 10 min。 抗体阳性的孔中会逐渐显示出蓝色 。 i) 所有孔中加 50 µL/孔的终止液，显示蓝色的孔此时会变成黄色。