ICS 11.080 C 50 WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 650—2019 抗菌和抑菌效果评价方法 Evaluting Method for Efficacy of Antibacterial and Bacteriostasis 2019 - 01 - 30发布 2019 -07 - 01实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 WS/T 650—2019 I 前 言 本标准按照 GB/T1.1-2009的规定进行编写 。 本标准由江苏省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、山东省疾 病预防控制中心、黑龙江省疾病预防控制中心负责起草。 本标准主要起草人 ：徐燕、谈智、张流波、陈越英、吴晓松、林玲、孙启华、崔树玉、赵华伟、吴 克、张文生、王裕荣、吴晓、沈瑾、李炎、孙巍、王玲、王嵬、王晓蕾、褚宏亮。 WS/T 650—2019 1 抗菌和抑菌效果评价方法 1 范围 本标准规定了抗菌和抑菌评价方法的选择原则和使用。 本标准适用于具有抗菌和 (或)抑菌功能产品的抗菌、抑菌效果的鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日 期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 15979 一次性使用卫生用品卫生标准 FZ/T 73023 抗菌针织品 消毒技术规范 （2002版） 卫生部（卫法监发〔 2002〕282号） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗菌 antibacterial 采用化学或物理方法杀灭或妨碍细菌生长繁殖，可减少其数量以及活性的过程。 3.2 抑菌 bacteriostasis 采用化学或物理方法抑制或妨碍细菌生长繁殖及其活性的过程。 3.3 持续抗菌作用 sustained antibacterial action 具有抗菌作用的消毒产品涂于物体表面，持续 7d以上仍具有杀灭或妨碍细菌生长繁殖作用。 3.4 中和剂 neutralizer 在杀灭微生物试验中， 用以消除试验微生物与消毒剂的混悬液中， 以及微生物表面上残留的消毒剂， 使其失去对微生物抑制和杀灭作用的试剂。 4 评价方法的选择原则 WS/T 650—2019 2 4.1 抗菌试验与抑菌试验区别 抗菌试验：测定抗菌产品对细菌和真菌的抗菌作用，试验过程中需要用中和剂终止杀菌作用。 抑菌试验：测定抑菌产品对细菌和真菌的抑菌作用，试验过程中不需 要使用中和剂终止抑菌作用。 4.2 根据产品性能选择合适的评价方法 4.2.1 抑菌效果评价方法的选择原则 抑菌类产品选择抑菌效果评价方法。液体抑菌产品选择悬液定量抑菌试验，膏体或半固体凝胶类、 黏稠状抑菌产品选择载体浸泡定量抑菌试验，湿巾类或其他自身含有抑菌成分的产品选择载体抑菌试 验，肥皂类固体抑菌产品选择抑菌环试验，含有可溶性抑菌成分的纺织品选择浸渍抑菌试验，含有持续 抑菌作用的抑菌洗液选择滞留抑菌试验。 4.2.2 抗菌效果评价方法的选择原则 抗菌类产品选择抗菌效果评价方法。液体抗菌产品选择悬液定量杀菌试验，凝胶状或膏状抗菌产品 选择载体 浸泡定量杀菌试验，湿巾类或其他自身含有抗菌成分的产品选择载体杀菌试验，含有可溶性抗 菌成分的纺织品选择浸渍抗菌试验。 含有不可溶抗菌成分的纺织品、无纺布、纤维等，经鉴别不含可溶性抗抑菌成分后，采用烧瓶振荡 试验。 含有不可溶抗菌成分的瓷砖、塑料、金属、涂料等，采用贴膜试验；对于涂于表面，干燥后具有持 续抗菌作用的产品，进行持续抗菌试验。 5 评价方法 5.1 抑菌效果 5.1.1 悬液定量抑菌试验 5.1.1.1 适用范围 适用于液体抑菌制剂如卫生洗液、抑菌喷雾剂等对微生物抑菌效果的测定。 5.1.1.2 试剂、培养基及器材 5.1.1.2.1 试验菌株 金黄色葡萄球菌（ ATCC 653 8）、大肠杆菌（ 8099）、白色念珠菌（ ATCC 10231 ）及根据抑菌剂特 定用途所用的其他菌株。 5.1.1.2.2 试剂 稀释液： 0.03 mol/L 磷酸盐缓冲液（ PBS）（pH7.2～7.4），培养基：金黄色葡萄球菌和大肠杆 菌的培养使用营养琼脂培养基，白色念珠菌的培养使用沙氏琼脂培养基。 5.1.1.2.3 器材 恒温水浴箱、计时器、Ⅱ级生物安全柜等。 5.1.1.3 试验步骤 WS/T 650—2019 3 取试验菌 24h新鲜斜面培养物用 PBS洗下，用 PBS稀释至约 5.0×105 CFU/mL～4.5×106 CFU/mL菌悬液 备用。取无菌试管，先加入 5.0 mL样品（根据使用说 明书要求使用原液或稀释液），置 20℃±1℃ 水浴 中5min后，再加入 0.1 mL试验用菌悬液，迅速混匀并立即计时。待试验菌与样品相互作用至说明书的规 定时间，分别吸取 1.0 mL试验菌与样品混合液接种 2个平皿，倾注培养基。菌量无法计数时，以 PBS做10 倍系列稀释，选适宜稀释度分别吸取 1.0 mL接种2个平皿，做活菌培养计数。同时用 PBS代替样品，进行 平行试验，作为阳性对照。阳性对照回收菌落数在 1.0×104 CFU/mL～9.0×104 CFU/mL之间。取同批次 PBS、培养基作阴性对照。所有试验样本和对照样 本均在36℃±1℃培养，细菌繁殖体培养 48h观察最终 结果；白色念珠菌培养 72h观察最终结果。试验重复 3次，计算抑菌率。 5.1.1.4 抑菌率计算 %100 01 0AAAX ................................ ... (1) 式中： X—抑菌率， %； A0—阳性对照组回收菌量，单位为 CFU/mL； A1—试验组回收菌量，单位为 CFU/mL。 5.1.1.5 结果判定 抑菌率≥ 50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥ 90%，判有较强抑菌作用。 5.1.2 载体浸泡定量抑菌试验 5.1.2.1 适用范围 适用于膏体或半固体凝胶类、黏稠状抑菌 产品对微生物抑菌效果的测定。 5.1.2.2 试剂、培养基及器材 载体为10 mm×10 mm脱脂白平纹布片，脱脂方法依照《消毒技术规范》（ 2002版）进行，使用前压 力蒸汽灭菌备用，电子天平（ d=0.01g），其它同 5.1.1.2。 5.1.2.3 操作步骤 取试验菌 24h新鲜斜面培养物用 PBS洗下，用 PBS稀释至约 5.0×106 CFU/mL～5.0×107 CFU/mL制成菌 悬液备用。用微量移液器滴染 10 μl菌悬液于灭菌载体上， 36℃±1℃烘干或室温晾干备用。 按5 g/片的量称取样品于无菌平皿内，置 20℃±1℃水浴5min，用无菌 镊子取染菌载体，使载体完 全浸没于样品中， 立即计时。 待染菌载体与样品相互作用至说明书的规定时间， 分别取染菌载体加入 5.0 mLPBS试管中，混匀，振荡，将试验菌洗下，分别吸取 1.0 mL样液，按活菌培养计数方法测定存活菌数， 每管样液接种 2个平皿。如平板上生长的菌落数较多时，可用 PBS进行10倍系列稀释后，再进行活菌培养 计数。取 10.0 g与试验样品同质材料不含抑菌成分的对照样品浸泡 2片染菌载体进行平行试验，作为阳 性对照。阳性对照回收菌量为 1.0×104 CFU/片～9.0×104 CFU/片。取同批次 PBS、培养基作阴性对照。 所有试验样本和对照样本均在 36℃±1℃培养，细菌繁殖体培养 48h观察结果；白色念珠菌培养 72h观察 结果。试验重复 3次，计算抑菌率。 5.1.2.4 抑菌率计算 WS/T 650—2019 4 %100 01 0AAAX ................................ ... (2) 式中： X—抑菌率， %； A0—对照样品的平均菌落数，单位为 CFU/片； A1—被试样品平均菌落数，单位为 CFU/片。 5.1.2.5 结果判定 抑菌率≥ 50%～90%，判有抑菌作用；抑菌率≥ 90%，判有较强抑菌作用。 5.1.3 载体抑菌试验 5.1.3.1 适用范围 适用于含溶出 性抑菌成分的湿巾、无纺布口罩、卫生巾、护垫、尿布等固体类抑菌产品对微生物抑 菌效果的测定。 5.1.3.2 试剂、培养基及器材 见5.1.1.2。 5.1.3.3 试验步骤 取试验菌 24h新鲜斜面培养物用 PBS洗下， 用PBS稀释至约 105 CFU/mL～106 CFU/mL，制成菌悬液备用。 用灭菌剪刀在无菌条件下将试验样品和对照样品分别剪成 20 mm×30 mm样片备用。试验时滴加 0.1 mL 菌悬液。对照样片染菌前需经压力蒸汽灭菌。取无菌平皿，用无菌镊子取 2片试验样片，勿重叠，置 20℃ ±1℃水浴5min，在每一样片上滴加 0.1 mL试验用菌 悬液，立即计时。待试验菌与样片接触作用至说明 书的规定时间，分别夹取染菌样片加于 5.0 mLPBS 试管中，混匀。振荡洗脱，分别吸取 1.0 mL样液，按 活菌培养计数方法测定存活菌数，每管样液接种 2个平皿。如平板上生长的菌落数较多时，可 10倍